تولید پروتئین دوگانه espa- tir از باکتری اشریشیا کلی o157:h7 در گیاه توتون (nicotiana tobbacum)

باکتری e.coli o157:h7 یک پاتوژن مهم انسان و حیوان است که در انسان موجب بروز اسهال خونریزی دهنده و سندرم اورمی همولتیک (hus) می­شود. اتصال به سلول­های میزبان اولین گام در تثبیت این باکتری است که به واسطه سیستم ترشحی نوع iii (t3ss) و از طریق میانکش بین پروتئین­های ترشحی صورت می­گیرد. در این میان espa به عنوان جزء اصلی تشکیل دهنده سیستم ترشحی است و ارتباط تنگاتنگی با اتصال اولیه­ باکتری به سلول میزبان و تشکیل بیوفیلم باکتریایی دارد. espa به سبب ساختار خود و قرارگرفتن در غشاء باکتری، یک ایمنی­زای قوی می­باشد. tirنیز پروتئینی است که پس از بیان در باکتری و از طریق t3ss به سلول میزبان منتقل و در غشاء آن مستقر می­شود و نقش مهمی در اتصال باکتری به میزبان دارد. هدف از این تحقیق ساخت سازه ژنی که دارای فاکتورهای فوق الذکر (espa-tir) بوده و انتقال آن به درون گیاه هدف می باشد. در راستای ساخت واکسن خوراکی کارا بر علیه باکتری اشریشیا کلی o157:h7. پس از بررسی­های بیوانفورماتیکی سازه­ ژنی دو قسمتی و espa-tir توسط رابط جداکننده پپتیدی به یکدیگر متصل و ژن آن ها به طور مصنوعی ساخته شد. پس از بهینه سازی کدون‏ها براساس گیاه تنباکو، تحت کنترل پروموتر camv35s در ناقل بیانی گیاه کلون گردید. سپس تراریختی و باز‏زایی گیاه تنباکو با آن انجام گرفت. آنالیز­های انجام شده مشخص کرد که ژن های مربوطه در گیاه موردنظر وارد و بیان می­گردد